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當前位置:首頁技術(shù)文章50%的科學家,因為這個原因?qū)嶒灲Y(jié)果無法重現(xiàn)?

50%的科學家,因為這個原因?qū)嶒灲Y(jié)果無法重現(xiàn)?

更新時間:2019-07-31點擊次數(shù):2349

 

 

實驗失敗時,害怕的是什么?

對,就是對失敗的原因一無所知。

我們會懷疑儀器試劑、懷疑實驗方法、

懷疑操作流程,甚懷疑人生。

常常有實驗員哭訴,

為什么免疫學實驗又雙叒叕失敗了?

殊不知,

問題很有可能出現(xiàn)在選抗體上。

 

 

我們都知道,WB、IHC、ELISA等常規(guī)實驗技術(shù)都離不開抗體,抗體的質(zhì)量優(yōu)劣關(guān)乎實驗的成敗,一旦抗體造假,不僅浪費了科研者的寶貴時間、金錢及實驗材料,甚有可能讓研究者誤入歧途(得出一系列錯誤的實驗結(jié)果或重復性差),而這無形中會損害他們所作出的努力以及學術(shù)聲譽。

 

抗體造假,是整個試劑行業(yè)嚴重的現(xiàn)象。據(jù)機構(gòu)顯示,在上千份抗體產(chǎn)品質(zhì)量投訴中,假貨問題占了43%;在500份問卷調(diào)查中,有43%的人曾使用假冒偽劣試劑耗材;703位生物學家,50%無法重復自己的實驗結(jié)果。

抗體造假手段可謂是五花八門,比如直接造假(根本不知道瓶子里裝的是什么)、用分子量接近的廉價抗體冒充昂貴的稀有抗體(很難檢測出來)等,常見的就是稀釋抗體,把一份試劑稀釋成5份,導致效價下降,有時有用,有時沒用。

 

關(guān)于抗體質(zhì)量穩(wěn)定性和可靠性問題,早在08年,瑞士科研項目HPA就曾對29家供應商的9000多種抗體(包括單抗和多抗)進行WB和IHC驗證,來檢測這些抗體是否有效。其結(jié)果竟令人大跌眼鏡:49%的抗體*無效,且僅有7%的抗體被認為是*有效且擁有前后實驗一致性。據(jù)估計,每年因購買質(zhì)量差的抗體導致的損失達到8億美金。而抗體之所以這么不穩(wěn)定并難以產(chǎn)生有效性,究其原因,一方面是因為抗體市場龐雜帶來了抗體質(zhì)量的殘次不齊,另一方面則是因為抗體本身就具有抗原交叉反應性、多樣性和實驗差異性,進而也會影響抗體的特異性和親和性。即使是未經(jīng)污染的抗體有時也會給實驗帶來困難,不同批次的抗體可能存在自然差異,它們可能靶向研究者預期之外的蛋白質(zhì)。所以陰性結(jié)果可能是多種原因?qū)е碌模@種不確定性使得假冒試劑很難被發(fā)現(xiàn)。

 

現(xiàn)階段我們身處于抗體亂象泥潭之中,如何獲得一支真正有效的抗體?如何選擇和購買抗體是關(guān)鍵,想要買到性價比高的抗體,有沒有隱藏的規(guī)則,如何煉就自己的火眼金睛?請繼續(xù)往下看。

 

 

1. 抗體基本的信息

 

  1. 要購買的抗體名稱(基因名,蛋白名都可以,比如AKT);

  2. 要用于什么實驗(可用于多種實驗,比如WB/IHC/FCM/IF);

  3. 樣本是什么種屬(可用于多種種屬,比如human/mouse/rat/rabbit);

  4. 如果是磷酸化抗體的:對磷酸化位點是否有要求,一般提供要檢測的磷酸化位點,如果使用者對磷酸化位點沒有要求的,就由查到的品牌廠家來推薦,廠家會推薦他們賣得比較多而且效果比較好的磷酸化抗體。

 

 

 

2. 單克隆和多克隆的選擇

 

有人認為單抗比多抗好,其實這并不是一個嚴謹?shù)挠^點,只能說在可能性上單抗的特異性更好一些,而多抗的親和力會優(yōu)于單抗,并且特異性并不一定就遜于單抗,主要看抗原的設計水平。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好。在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好,不宜同源。

 

3. 抗體選擇的隱藏規(guī)則  

 

  1. 質(zhì)量好,價格便宜(性價比高,索萊寶產(chǎn)品價格是國外的1/3左右,而且有小包裝規(guī)格);

  2. 到貨速度快(國外公司一般3-4周,索萊寶公司大多有現(xiàn)貨,多1周);

  3. 售前售后有保障(國外抗體咨詢投訴周期一般都非常長,索萊寶公司一般1周就可以解決,還可以免費索取一些抗體小樣,抗體免費試用活動正在火熱進行);

  4. 抗體的運用可以多種實驗,反應物種可以多樣(實驗必須是同一類實驗,別人做IHC的抗體用做WB可能是沒有結(jié)果的);

  5. 廠家發(fā)布出的實驗效果圖(完善的驗證數(shù)據(jù)及詳細的信息標準是抗體選擇的必要條件),比如是否明確標注其可以用于WB、IHC等實驗、是否有足夠的數(shù)據(jù)支持證明該抗體適用于某一組織或者樣本(樣本的處理過程和要求)、是否有明確的抗體建議稀釋濃度、該抗體的識別位點是連續(xù)的氨基酸序列的一級結(jié)構(gòu)還是非連續(xù)性氨基酸的三維結(jié)構(gòu)位點,天然的還是變性的……這些信息和數(shù)據(jù)的真實性及完整性是保證WB、IHC等實驗順利進行的關(guān)鍵;

  6. 別找純代工的品牌多花冤枉錢,制造和生產(chǎn)型的供應商對自己產(chǎn)品更加了解,出現(xiàn)問題容易找到原因;

  7. 一定要從正規(guī)渠道購買(生產(chǎn)商和制造商或正規(guī)的授權(quán)經(jīng)銷商);

  8. 有效的內(nèi)參抗體是實驗結(jié)果真實可靠的重要憑證,尤其在WB實驗中,常會借助內(nèi)參來校正蛋白定量、上樣過程中存在的實驗誤差。值得注意的是,不同的內(nèi)參抗體只適用于一定范圍的樣本和組織,我們需要查閱參考文獻,并根據(jù)樣本和組織的差別選擇合適的內(nèi)參抗體,以確保實驗的準確性,索萊寶擁有完備的標簽內(nèi)參抗體庫

  9. 常言道,實踐是檢驗真理的標準,對于文獻或網(wǎng)站中現(xiàn)成的已經(jīng)驗證過的親和力高、特異性強的抗體,我們只需將拿來主義進行到底即可。此時仍需要特別注意的是文章的可靠性;即便如此,在相應抗體購買回來后,建議做些簡單預實驗來保證抗體的特異性。如果只有陽性有條帶,陰性沒有條帶,恭喜你,你確實買到了一支靠譜的好抗體,可以放心大膽的開始正式實驗了。

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4. 進口or國產(chǎn)品牌的選擇

 

常見的國產(chǎn)品牌也有很多,如國產(chǎn)索萊寶品牌這幾年猶如異軍突起,近年來也被國內(nèi)外學術(shù)界認可。無論是在價格上(折后價格一千多元)、在質(zhì)量上、包裝上(含有小包裝)、到貨速度上(2-3天)、售前咨詢、售后支持以及暫時還未出現(xiàn)假貨等方面,都能完勝其他進口品牌,不足之處:非常用產(chǎn)品在文獻支持方面有些不足。為此我們特設專項獎學金計劃,期望大家踴躍參與,無論是發(fā)文章,曬圖片和寫評論我們都有獎品或獎金給辛苦實驗的科研工作者,旨在建立產(chǎn)品應用數(shù)據(jù)庫,為抗體的選擇和應用提供參考價值。

 

 

5. 抗體的未來之星

不要小看一小瓶試劑,這是一個國家綜合實力的體現(xiàn)。中國的試劑想要*打入市場,還需要很長時間。事實上,抗體質(zhì)量問題從來不是一個技術(shù)問題而是一個商業(yè)利益和科研需求之間產(chǎn)生的矛盾問題,大量抗體產(chǎn)品本身就是在國內(nèi)本土生產(chǎn),中國*具有能力生產(chǎn)高質(zhì)量抗體,與其繞遠,不如加大鼓勵民族本土品牌崛起。索萊寶與您一起披荊斬棘,開疆拓土,打造中國人自己的科研產(chǎn)品小*,索萊寶相信在我們的共同努力下,一定可以讓我們自己的科研產(chǎn)品民族品牌流光溢彩。

目前,索萊寶專注于自主品牌的創(chuàng)立,建立的自主研發(fā)平臺,同時聘請業(yè)內(nèi)資深團隊原料的把關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)生產(chǎn)和質(zhì)控等各個環(huán)節(jié)嚴格控制,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。同時我們順應抗體驗證工作組發(fā)布的驗證抗體特異性五大策略的標準和要求,逐步建立抗體驗證平臺,對抗體進行驗證,力求為科研工作者提供抗體選用的參考信息,進而提升我們產(chǎn)品的市場競爭力,增加國產(chǎn)科研產(chǎn)品的*。

 

此外,科研工作者們可共同努力,提高對假貨的意識。共享避免假貨的建議,甚可以公布銷售低質(zhì)量產(chǎn)品公司的黑名單。只有用戶積極參與到反饋數(shù)據(jù)分享,建立科研行業(yè)的“大眾點評”,才能夠以第三方監(jiān)督的機制促進行業(yè)改革。請不要盲目相信進口,也不要對國產(chǎn)嗤之以鼻,事實上,選抗體就像選對象,適合的才是好的。

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