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當前位置:首頁技術文章專家解析單細胞分析技術:簡單的染色成像方法

專家解析單細胞分析技術:簡單的染色成像方法

更新時間:2013-05-27點擊次數:1800

 

來自東京大學干細胞生物學與再生醫學研究室Hiromitsu Nakauchi教授希望能了解干細胞增殖和重編程過程中的分子級聯信號,因此他分析了造血干細胞中蛋白磷酸化造成的影響。
在這項研究中,Nakauchi教授采用了一種簡單的免疫染色技術:單細胞磷酸成像分析(single-cell imaging of phosphorylation assaySCIPhos)。先將大約50個細胞想排列在載玻片上,然后進行染色,通過共聚焦顯微鏡進行觀察,通過這些染色了的磷酸化修飾蛋白,Nakauchi教授可以了解哪些蛋白處于活性狀態,哪些蛋白失活了,以及這些蛋白的位置。Nakauchi教授說,“我的一些學生也利用這個方法來做Western Blotting”。
這種SCIPhos方法的優點就是不僅僅能觀察磷酸化蛋白,而且能分析蛋白的位置,這有利于揭示關鍵的生物信息。缺點就是每個細胞需要單個成像,如果需要處理上千個細胞,那就是一個繁重的實驗了。因此這個方法比較合適分析少量的細胞,其中的小技巧就是要多注意防止水分蒸發,Nakauchi教授就是采用的在細胞液滴的周圍,用阻水筆(water-repellent pen)繞著畫一圈,這樣液滴就不會干燥得太快。
Nakauchi教授在干細胞研究領域成果頗豐,比如今年其研究組曾成功的利用大鼠的iPS細胞(誘導多能性干細胞)培育出小鼠的胰腺,這是成功的將不同種動物的細胞生成內臟器官的實驗。
這項研究通過將大鼠的iPS細胞注入到小鼠胚球中,在缺乏胰腺的小鼠中產生了一個具有功能的大鼠胰腺,這為再生醫療治療糖尿病開辟了一條新路。
一般的情況下,動物的受精卵經過反復的細胞分裂生成生物體的各個內臟器官,而研究人員卻改變了這一過程:他們令已被改變遺傳基因的雌、雄小鼠進行交配,得到無法自主生成胰臟的小鼠受精卵。三天后,他們又將從大鼠的尾巴中提取的1015iPS細胞注入已經分裂成胚胎的小鼠受精卵中,終培育出一只擁有大鼠胰臟的小鼠。
研究人員進行了大約150只小鼠實驗,但只得到了一只成年小鼠。研究結果表明這只小鼠擁有與大鼠相同的胰臟細胞,血糖值也保持正常。目前使用誘導多功能干細胞開展的再生醫療研究主要集中在對臟器和組織的修復上,雖然通過這種干細胞在體內培育器官的研究尚處起步階段,但相關研究成果為再生醫療領域的研究帶來了新希望。
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