細胞培養(yǎng) CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒

保存 ：4℃密封避光保存，有效期一年。

產品簡介 ：
    Cell Counting Kit-8 簡稱 CCK-8 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學名： 2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽） 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒?？捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗

使用說明 ：
一 、 制作標準曲線 （ 測定細胞具體數量時）
    1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
    2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度，每組 3-6 個復孔。
    3、接種后培養(yǎng)細胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X 軸） ，OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要*，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。 ）
二 、 細胞活性檢測
    1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100µL/孔） 。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（在 37℃,5% CO 2 的條件下） 。
    2、向每孔加入 10µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數） 。
    3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 小時。
    4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
    5、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。
三 、 細胞增值- 毒性檢測
    1、 在 96 孔板中配置 100 µL 的細胞懸液。 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 小時 （在 37 ℃， 5% CO2 的條件下） 。
    2、 向培養(yǎng)板加入 10µL 不同濃度的待測物質。 在培養(yǎng)箱孵育一段適當的時間 （例如： 6、 12、 24 或 48 小時） 。
    3、向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數） 。如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基） ，去掉藥物影響。
    4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 小時。
    5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
    6、如果暫時不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。

活力計算：.
    細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
    A（加藥） ：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
    A（空白） ：具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
    A（0 加藥） ：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
    細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

注意事項 ：
    ①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。
    ②白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
    ③當使用標準 96 孔板時，貼壁細胞的小接種量少為 1 ,000 個/孔 (100 µL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 µL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。
    ④如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 檢測靈敏度高。
    ⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

CCK-8法與其它檢測法之間的比較

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 相關文獻：

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