北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC1100
更新時間：2025-08-25
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1925
010-50973130
產品分類
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輔酶II NADP(H)含量檢測試劑盒（MTT顯色法）說明書
可見分光光度法
貨號：BC1100
規格：50T/24S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 酸性提取液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 堿性提取液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體12mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四A | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑四B | 液體5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| NADP標準品 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| NADPH標準品 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑四：臨用前將試劑四A溶解到試劑四B中，溶解后分裝保存，避免反復凍融，-20℃保存4周。
NADPH標準品：臨用前加入 1.2 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
產品說明：
輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NADP+和 NADPH 含量測定可以計算 NADP（NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應密切相關。NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態的主要標志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調控作用。
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測吸光值，從而測定 NADPH 含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測NADP+含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：
如果一次性測定樣本數較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
反應過程中注意避光。
由于每一個測定管需要設一個對照管，本試劑盒50管可以測定24個NADP+或NADPH。
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
實驗實例：
NADPH的測定：稱取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A2’- A1’=0.046-0.012=0.034，標準曲線y2=0.332x+0.0136，根據標曲得出x2=0.061，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質量）= x2÷W=0.614 nmol/g 質量。
NADP+的測定：稱取 0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定= A2- A1=0.217-0.108=0.109，標準曲線y1=0.531x+0.0266，根據標曲得出x1=0.155，NADP+含量得：NADP+ (nmol/g 質量）= x1÷W=1.55 nmol/g 質量。
NADPH的測定：稱取0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A2’- A1’=0.085-0.008=0.077，標準曲線y2=0.332x+0.0136，根據標曲得出x2=0.191，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質量）= x2÷W=1.91 nmol/g 質量。
NADP+的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定= A2- A1=0.055-0.026=0.029，標準曲線y1=0.531x+0.0266，根據標曲得出x1=0.005，NADP+含量得：NADP+ （nmol/mL）= 11 x1=0.050 nmol/mL。
NADPH的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A2’- A1’=0.028-0.012=0.016，標準曲線y2=0.332x+0.0136，根據標曲得出x2=0.007，NADPH含量得：NADPH（nmol/mL）=11 x2=0.080 nmol/mL。
標準溶液稀釋表
NADP+標準品稀釋表 NADPH 標準品稀釋表
| 序號 | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） | 序號 | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） | |
| 1 | 5000 | 10 | 990 | 50 | 1 | 5000 | 10 | 990 | 50 | |
| 2 | 50 | 100 | 900 | 5 | 2 | 50 | 100 | 900 | 5 | |
| 3 | 5 | 200 | 600 | 1.25 | 3 | 5 | 200 | 200 | 2.5 | |
| 4 | 1.25 | 200 | 200 | 0.625 | 4 | 2.5 | 200 | 200 | 1.25 | |
| 5 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 | 5 | 1.25 | 200 | 200 | 0.625 | |
| 6 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 | 6 | 0.625 | 200 | 200 | 0.3125 | |
| 7 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 | 7 | 0.3125 | 200 | 200 | 0.15625 | |
| 8 | 0.078 | 200 | 200 | 0.039 | 8 | 0.15625 | 200 | 200 | 0.078 | |
| 9 | 0.039 | 200 | 200 | 0.0195 | 9 | 0 | 200 | 200 | 0 | |
| 10 | 0.0195 | 200 | 200 | 0.01 | ||||||
| 11 | 0 | 0 | 200 | 0 |
輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒
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