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產(chǎn)品型號：BC0400-50T/48S
更新時間：2024-04-24
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1706
010-50973130
產(chǎn)品分類
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紫外分光光度法
貨號：BC0400
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：用時加入50 mL提取液溶解；
試劑二：用時每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；
試劑三：用時每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；
工作液配制：將試劑一、試劑二、試劑三按85：1：1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成α-酮戊二酸，同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應，在340nm下測定NADPH濃度的增加，即可反映ICDHc活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
“具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項：
1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋。
2、實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；工作液37℃水浴放置。
3、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
4、最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。
實驗實例：
取0.1g稗草，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.240-0.224=0.016，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W=257.28 U/g 質(zhì)量。
取0.1g小鼠肺部組織，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清稀釋5倍，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.253-0.141=0.112，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W×5=9004.8 U/g 質(zhì)量。
取小鼠血清樣本直接檢測，測得計算ΔA=A2-A1=0.225-0.2=0.025，按血清計算得：
ICDHc活性（U/mL）=1608×ΔA=40.2 U/mL。
參考文獻：
Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.
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