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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4930-50T/24S
更新時間：2024-04-17
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1239
010-50973130
產品分類
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肌酸含量檢測試劑盒（酶法）說明書
可見分光光度法
貨號：BC493
規格：50T/24S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑四A液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四B液 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前每支加入1 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。
試劑二：臨用前每支加入0.2 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存。
試劑三：臨用前每支加入0.5 mL蒸餾水（100T/48S），充分溶解。為方便儲存故多給一支。用不完的試劑分裝后-20℃保存。
試劑四：臨用前根據試驗所需用量，按照試劑四A液：試劑四B液=1:1，充分混勻，現用現配。
標準品：1 mg一水肌酸。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，即1 mg/mL一水肌酸標準儲備液。臨用前取20μL和80μL蒸餾水混合配制成200μg/mL作為標準溶液待測?，F用現配。
產品說明：
肌酸(Creatine)是一種含氮化合物，自然存在于脊椎動物體內，能夠輔助為肌肉和神經細胞提供能量。肌酸可由精*酸（arginine)、甘*酸（glycine）及甲硫*酸（methionine）三種氨基酸合成，可由人體自行合成，也可以從食物中攝取。大約95%的肌酸存在于骨骼肌中，主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補充劑主要通過增加肌肉質量，增強運動表現能力。肌酸也被作為神經肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究，它可能有助于保護神經和改善細胞生物功能狀態。
肌酸酶偶聯肌氨酸氧化酶，可將肌酸轉化為甘*酸、甲醛、過氧化氫，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林偶聯酚，生成有色化合物，在505nm 有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數量（104個）: 提取液一體積（mL）為500~1000 : 1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔9秒，總時間5 min）；于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
2、組織樣本的制備：按照質量（g）: 提取液一體積(mL)為1: 5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
3、血清（漿）：取100 μL血清（漿）加入1 mL提取液一，4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30 min以上，調節波長至505 nm，蒸餾水調零。
2、 按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標準管 |
樣本 | 50 | 50 | - | - |
蒸餾水 | - | 50 | 50 | - |
標準溶液 | - | - | - | 50 |
試劑一 | 50 | - | 50 | 50 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，反應10 min。 | ||||
試劑二 | 5 | 5 | 5 | 5 |
試劑三 | 5 | 5 | 5 | 5 |
試劑四 | 400 | 400 | 400 | 400 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，顯色30 min。 | ||||
蒸餾水 | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻，測定505 nm處的吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標準。ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。 | ||||
注：空白管只需做1-2次。
三、肌酸含量計算
1、 計算公式
（1）按照蛋白濃度計算
肌酸含量（μg/mg prot）=C標×ΔA測÷ΔA標×V樣÷（V樣×Cpr）×0.879=175.8×ΔA測÷ΔA標÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
肌酸含量（μg/g 質量）=C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×0.879
=208.76×ΔA測÷ΔA標÷W
（3）按照細菌或細胞數量計算
肌酸含量(μg/104 cell) = C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷(細胞數量×V上清÷V提取液一)×0.879
= 208.76×ΔA測÷ΔA標÷細胞數量
（4）按照血清（漿）體積計算
肌酸含量(μg/mL) =C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]×0.879 =2296.39×ΔA測÷ΔA標
C標：標準管濃度，200 μg/mL；V樣：加入樣本體積，50 μL=0.05mL；V上清：提取時上清液體積，0.8 mL；V提取液一：加入提取液一體積，1 mL；V提取液二：加入提取液二體積，0.15 mL；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數量：以104計；V液體：液體樣本體積，0.1 mL；0.879：換算系數，一水肌酸相對分子質量149.15，無水肌酸相對分子質量131.13，0.879=131.13÷149.15。
注意事項：
1、 顯色完成后，請在10 min之內完成檢測。
2、 提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酐含量需要另取組織或血清（漿），即取相同質量（體積）的組織（血清（漿））用1.1875mLPBS（生理鹽水）勻漿（相當于提取步驟最終樣本上清液），用BCA法進行蛋白濃度測定。
3、 如果測定吸光值超過標準管吸光值，建議用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。如果測定吸光值過小，建議增大樣本量后再進行測定。
實驗實例：
1、 取0.1g大鼠肌肉加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.752-0.012=0.74，ΔA標準= A標準-A空白=0.672-0.014=0.66。按樣本質量計算含量得：肌酸含量（μg/g 質量）=208.76×ΔA ÷ΔA標÷W =2340μg/g 質量。
2、 取100μL牛血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.061-0.016=0.045，ΔA標準= A標準-A空白=0.672-0.014=0.66。按照液體體積計算含量得：肌酸含量（μg/mL）=2296.39×ΔA測定÷ΔA標準=156.57 μg/mL血清。
肌酸含量檢測試劑盒（酶法） 氮代謝 肌酸含量檢測試劑盒（酶法） 氮代謝
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