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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC3070-50T/24S
更新時間：2025-08-29
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1386
010-50973130
產品分類
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土壤酸性轉化酶（S-AI）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3070
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶加入15 mL試劑一充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存2周；
標準品：10 mg無水葡*糖。臨用前加入1 mL試劑一充分溶解，制備10 mg/mL葡萄糖標準溶液待用，2-8℃保存兩周。
產品說明：
S-AI在pH為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關鍵酶之一。S-AI催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內540nm光吸收增加速率與S- AI活性成正比。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫培養箱/水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。
標準液的稀釋：將10mg/mL葡萄糖標準液用試劑一稀釋至0.2、0.15、0.1、0.08、0.06mg/mL的葡萄糖標準液備用。
標準液稀釋表
| 序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
| 1 | 10 | 100 | 1900 | 0.5 |
| 2 | 0.5 | 400 | 600 | 0.2 |
| 3 | 0.5 | 300 | 700 | 0.15 |
| 4 | 0.5 | 200 | 800 | 0.1 |
| 5 | 0.5 | 160 | 840 | 0.08 |
| 6 | 0.5 | 120 | 880 | 0.06 |
備注：試驗中每個標準管需標準品800µL。
樣本測定：
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
| 風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 試劑一（μL） | - | 800 | - | 800 |
| 試劑二（μL） | 800 | - | - | - |
| 標準液（μL） | - | - | 800 | - |
| 甲苯（μL） | 20 | 20 | 20 | 20 |
| 混勻，于37℃水浴/恒溫培養箱準確反應1h后，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），流水或冰浴冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），10000rpm，常溫離心10min，取上清。 | ||||
| 上清（μL） | 700 | 700 | 700 | 700 |
| 試劑三（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
混勻，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分流失），流水冷卻后，540nm處蒸餾水調零，記錄各管吸光值A，記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。
三、S-AI活性計算
標準曲線的繪制：
根據葡萄糖標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
S-AI活性計算
單位定義：37℃每g土壤每天產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
S-AI（U/g 土樣）=x×V÷W÷T=19.2×x÷W
V：加入的標準液體積，0.8mL；W：樣本質量，g；T：反應時間：1/24d。
注意事項：
1、如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現，建議離心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清測定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以將上清液再進行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數。兩種操作均要注意改變公式中的稀釋倍數。
實驗實例：
取兩管0.1g林土，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.425-0.054=0.371，標準曲線：y=6.0331x-0.3103，x=0.113，計算酶活得：S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土樣。
取兩管0.1g林土，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.410-0.055=0.355，標準曲線：y=6.0331x-0.3103，x=0.110，計算酶活得：
S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土樣。
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